De ce se utilizează GAPDH în Western Blot? + Exemplu

Răspuns:

GAPDH este adesea folosit ca un control de încărcare.

Explicaţie:

În Western blot folosim adesea GAPDH ca un control de încărcare. Ceea ce inseamna asta este ca, prin cercetarea pentru GAPDH, putem verifica daca avem o cantitate echivalenta de proteine incarcate pe diferite benzi ale blotului.

Un exemplu de utilizare - spune că avem o boală pe care credem că o provoacă o creștere a unei anumite proteine în celulă. Am face o mostră din celulele "sănătoase" și o altă probă din celulele "bolnave". Apoi vom încărca cantități echivalente de proteine din ambele probe pe un gel pentru blotul Western.

După ce s-au detectat petele pentru proteina noastră de interes, descoperim că în celulele bolnave nivelul proteinei este într-adevăr ridicat (adică o bandă mai închisă este produsă pe blot). Pentru a demonstra că această creștere a proteinei se datorează unei schimbări de expresie în celulă, în loc de un artefact de încărcare (adică, banda mai intensă este cauzată de o schimbare a expresiei proteinei în celule și nu de încărcarea accidentală de către noi a eșantionului "boală" decât a "sănătosului"), vom încerca, de asemenea, blotul pentru GAPDH pentru a arăta că nivelurile totale de proteine sunt aceleași în ambele benzi.

Prin aceasta, demonstrăm că proteinele echivalente au fost încărcate în cele două benzi și că modificarea intensității benzii pe care o observăm se datorează modificărilor expresiei proteinei pentru proteina de interes.