Răspuns:
De obicei, acesta este un test de specificitate a anticorpilor.
Explicaţie:
Într-un test ELISA este foarte dificil să afli dacă anticorpul dumneavoastră este sau nu legat de proteina de interes, o proteină complet diferită sau o gamă de proteine.
Western blotul va fi utilizat pentru a verifica specificitatea anticorpului (trebuie să rețineți că blotul Western nu poate detecta toate reacțiile încrucișate cu proteine incorecte).
În Western blot, puteți vedea dimensiunea proteinei la care anticorpul este obligatoriu (nu puteți într-o ELISA). De aceea, de exemplu, dacă anticorpul dumneavoastră ar trebui să fie legat la o proteină de 56 kDa și veți vedea o bandă la ~ 56 kDa pe blot, atunci puteți avea în mod rezonabil încrederea că anticorpul este legat la proteina corectă.
Dacă, pe de altă parte, ați văzut o bandă la 32 kDa, ați putea concluziona că anticorpul este legat de proteina greșită. De asemenea, dacă mai multe trupe au apărut pe Western blot, atunci ar sugera (în absența degradării proteinei) că anticorpul a fost legat de o serie de proteine diferite.
În exemplul benzii de 32 kDa care apare pe gel și, de asemenea, benzile multiple, ar sugera că anticorpul nu are specificitate pentru ELISA și că orice rezultate observate în ELISA nu pot fi specifice proteinei de interes.
Dacă aș fi condus acest tip de test, pot include un fel de reactiv "interferant" pentru a testa anticorpul. De exemplu, dacă mi-am crescut anticorpul la o peptidă, am putea include peptida în soluția primară de anticorpi pentru a testa legătura corectă. Adică în prezența peptidei nu ar trebui să vadă nici o bandă sau niciun rezultat din ELISA deoarece anticorpul meu primar nu ar fi capabil să se lege din cauza prezenței unui exces de peptidă.
Pentru ce este folosit un scor z? + Exemplu
Un scor Z se aplică unei distribuții standard standard. Se folosește pentru calcule care necesită numărul abaterilor standard față de medie. De exemplu, z = -2 înseamnă pur și simplu două deviații standard la stânga mediei (media = 0). Sper că vă ajută
Pentru ce este publicul țintă? Se pare că este pentru elevii și studenții de nivel superior. Ar fi un loc bun pentru a pune întrebări pe domenii mai avansate (de exemplu, biologia dezvoltării) sau este în afara scopului vizat al site-ului?
Răspund la întrebări din domeniul matematicii. Se pare că majoritatea întrebărilor care primesc răspuns sunt nivel ridicat de liceu sau de începători. Nu știu dacă cei din biologie sunt implicați în zone mai avansate.
De ce se utilizează GAPDH în Western Blot? + Exemplu
GAPDH este adesea folosit ca un control de încărcare. În Western blot folosim adesea GAPDH ca un control de încărcare. Ceea ce inseamna asta este ca, prin cercetarea pentru GAPDH, putem verifica daca avem o cantitate echivalenta de proteine incarcate pe diferite benzi ale blotului. Un exemplu de utilizare - spune că avem o boală pe care credem că o provoacă o creștere a unei anumite proteine în celulă. Am face o mostră din celulele "sănătoase" și o altă probă din celulele "bolnave". Apoi vom încărca cantități echivalente de proteine din ambele probe pe un gel pentru blotul We