Ce este schimbul de cromatografie? + Exemplu

Ce este schimbul de cromatografie? + Exemplu
Anonim

Răspuns:

Este un proces de separare a diferitelor proteine pe baza proprietăților lor de încărcare și de legare la un material.

Explicaţie:

La diferite pH-uri proteine diferite au sarcini diferite. Prin plasarea unui amestec de proteine la un pH set, puteți avea un amestec care conține proteine cu proprietăți diferite de încărcare.

Dacă acest amestec de proteine este turnat pe o coloană care conține un material cu o încărcătură pe el, coloana va lega proteinele în încărcare opusă.

Apoi puteți utiliza diferite soluții care conțin cantități diferite de ioni pentru a elua (îndepărta) proteinele din coloană.

De exemplu, spuneți că ați avut un amestec de proteine din care doriți să purificați o anumită proteină. Dacă știați că, la un anumit pH, proteina dvs. de interes a fost încărcată pozitiv, ați putea turna amestecul într-o coloană care conținea material încărcat negativ.

Toate proteinele care nu purtau o încărcătură, sau când erau încărcate negativ, curgea direct prin coloană. Apoi, puteți elibera proteina încărcată pozitiv prin inundarea coloanei cu ioni pozitivi care ar completa încărcarea negativă a coloanei. Această competiție ar face ca proteina dvs. de interes să fie eluată.

Iată un exemplu de acest lucru.

Fiecare tavă conține un tampon la o concentrație diferită și așa cum se poate observa în proba de 175 mM (colțul din stânga sus), foarte puțină proteină roșie / brună se leagă de membrana încărcată deoarece există o concurență între ionii din tampon și proteine pentru siturile de legare încărcate de pe membrană (Ioniile din tampon au "câștigat" deoarece există mai multe dintre ele și astfel au împiedicat legarea proteinei). În proba din partea dreaptă de jos o mulțime de proteine s-au legat de membrană, deoarece există mai puțini ioni prezenți pentru a concura pentru site-urile de legare.

În acest videoclip puteți vedea cromatografia de schimb anionic în funcționare: