Răspuns:
Mulți…
Explicaţie:
Există multe motive pentru care benzile nu pot apărea pe un Western blot. Au avut combinații de eșantioane și anticorpi în trecut?
Mai jos sunt doar câteva pe care mă pot gândi în acest moment care ar putea face ca benzile să nu apară:
-
A transferat proteina din gel? Încercați să colorați membrana cu ceva de genul ponceau S sau amido negru pentru a vedea dacă sunt prezente benzile. Uneori, puteți vedea benzile de proteine de pe membrană umezindu-l și ținându-l sub un unghi față de lumină.
-
Anticorpul primar funcționează? Aceasta este una dificil de testat și singura modalitate prin care puteți fi este includerea unui control pozitiv în cazul în care știți că aveți proteinele de interes prezente. Dacă aveți o parte din proteina de interes, ați putea încerca să o pătrunzi pe membrana Western blotting (adică nu rulați gelul) și să vedeți dacă obțineți un rezultat dacă procesați membrana ca și cum ar fi o blândă westernă.
-
Anticorpul secundar recunoaște anticorpul primar? Din nou, unul dur pentru a testa. Despre singurul test pe care îl puteți face este testul la fața locului menționat mai sus la punctul 2.
-
Sistemul de detectare funcționează? În funcție de metoda de detectare pe care o utilizați, puteți încerca să introduceți o parte din anticorpul secundar pentru a vedea dacă funcționează soluția de detectare și, de asemenea, agentul / enzima de declanșare a anticorpului secundar. Adică, puteți declanșa reacția numai cu anticorpul secundar?
În cele din urmă, ar putea fi la fel de simplă ca una dintre soluțiile utilizate în timpul analizei parcelei să fie făcută incorect. De exemplu, dacă concentrația de sare este greșită în tampon, acest lucru poate determina eliberarea anticorpilor de pe blot. Același lucru s-ar întâmpla și în cazul în care pH-ul tampoanelor nu ar fi corect.
Cea mai "ciudată" cauză pentru un bloc western care nu funcționează pe care l-am experimentat personal a fost când am schimbat furnizorul de lapte praf pe care l-am folosit pentru a bloca membrana. Pulberea de la noul furnizor conține o fosfatazină fosfatrozină care îndepărtează toate grupările fosfat pe care încercam să le detectăm cu anticorpul nostru anti-fosfotirozină.
Biblioteca îți percepe o amendă când întorci târziu o carte de bibliotecă. Dacă este întârziată o zi, veți fi taxat (ă) cu 0,15 $, în cazul în care întârzieți cu două zile, veți fi taxat (ă) 0,30 $. Datoria bibliotecii este de 3,75 $. Câte zile sunt întârziate în biblioteca dvs.?
25 de zile ... ... pur și simplu împărți 3.75 de .15, dând 25 de zile. Ar trebui să vă fie rușine că l-ați păstrat atât de mult!
Ce se întâmplă dacă o persoană de tip A primește sânge B? Ce se întâmplă dacă o persoană de tip AB primește sânge B? Ce se întâmplă dacă o persoană de tip B primește O sânge? Ce se întâmplă dacă o persoană de tip B primește sânge AB?
Pentru a începe cu tipurile și ce pot accepta: Un sânge poate accepta sânge A sau O Nu sânge B sau AB. Sangele B poate accepta sangele B sau O Nu sangele A sau AB. Sângele AB este un tip universal de sânge, adică poate accepta orice tip de sânge, este un destinatar universal. Există un tip de sânge de tip O care poate fi utilizat cu orice tip de sânge, dar este puțin mai complicat decât tipul AB, deoarece poate fi dat mai bine decât cel primit. Dacă tipuri de sânge care nu pot fi amestecate sunt, dintr-un anumit motiv, amestecate, celulele sangvine din fiecare tip
Care este rata de schimbare a lățimii (în ft / sec) atunci când înălțimea este de 10 picioare, dacă înălțimea scade în acel moment la viteza de 1 ft / sec. Un dreptunghi are atât o înălțime schimbătoare, cât și o lățime în schimbare , dar înălțimea și lățimea se modifică astfel încât suprafața dreptunghiului să fie întotdeauna de 60 de metri pătrați?
Rata de schimbare a lățimii cu timpul (dW) / (dt) = 0,6 "ft / s" (dW) / (dt) = (dw) / dh dx dt dt (DW) / (dh) / (dw) / (dh) xx-1 = - (dW) / (dh) Wxxh = 60 W = 60 / (dt) = - (60) / (h ^ 2)) = (60) / (h ^ 2) Deci atunci când h = 10 : rArr (dW) / (dt) = (60) / (10 ^ 2) = 0,6 "ft / s"