De ce folosim un control negativ în PCR?

De ce folosim un control negativ în PCR?
Anonim

Răspuns:

Vezi mai jos

Explicaţie:

PCR funcționează dintr-un șablon ADN. Să spunem că testați pentru HIV (HIV este un virus ARN, dar când acesta intră într-o celulă, devine ADN-ul …. astfel încât va exista ADN HIV într-o celulă infectată). Primerii utilizați vor face un produs (amplicon) care corespunde unei părți din ADN-ul HIV. Dacă vedeți acest amplicon, atunci aveți secvența HIV prezentă ….. dar dacă nu aveți un control negativ, este posibil să aveți o contaminare.

PCR este extrem de sensibil. Există multe soluții utilizate în PCR (apă, tampon, dNTP, enzime) … și toate acestea pot fi ușor contaminate cu ADN din alte probe sau chiar din ampliconul care a fost făcut în reacția pe care ați făcut-o ieri. Deci, dacă aveți eșantion de ADN al pacientului X și verificați pentru HIV prin PCR, primerii PCR pot face un produs în afara ADN-ului HIV în proba de ADN a pacientului X (dacă persoana respectivă are HIV) sau poate face contaminare. Dar nu puteți spune dacă este vorba de contaminare sau de HIV la ADN-ul pacientului.

Deci, conduceți un control al apei. Tubul 1 puneți toate componentele reacției, iar pentru ADN adăugați doar apă. Acesta este controlul negativ. Nimic nu ar trebui să se amplifice aici. În tubul 2, puneți toate componentele de reacție și ADN-ul pacientului X. Dacă obțineți un produs aici (și nimic în Tubul 1), pacientul X probabil are ADN-ul HIV în ADN-ul său. Dacă obțineți un produs atât în Tubul 1, cât și în Tubul 2, aveți o problemă de contaminare și nu puteți afla dacă HIV în eșantionul pacientului este cauzat de boală sau de contaminare.

Deci aveți întotdeauna un control al apei (apă în loc de ADN).