În testul ELISA, ce fac anticorpii primari și anticorpii secundari?

În testul ELISA, ce fac anticorpii primari și anticorpii secundari?
Anonim

Răspuns:

Aceasta depinde de tipul de test ELISA.

Explicaţie:

ELISA = Testarea imunosorbantă legată de enzime.

Există diferite tipuri de teste ELISA. Ceea ce aveți nevoie este:

  • anticorp cu o enzimă atașată la acesta
  • antigen la care se leagă anticorpul
  • substrat al enzimei care determină o reacție măsurabilă

enzimă atașat la anticorp este de multe ori HRP (peroxidază de hrean). HRP poate reacționa cu diferite substraturi care fie schimbă culoarea, fie emite lumină, ambele măsurabile.

Imaginea prezintă o prezentare generală a imaginii tipuri diferite din testele ELISA. Voi explica cum funcționează mai jos.

ELISA direct

O placă este acoperită cu antigen (Ag) și a anticorp primar cu enzima este adăugată. Când se adaugă substratul, reacția va avea loc și este proporțională cu interacțiunea dintre anticorpul-antigen.

Metoda ELISA indirectă

Din nou, o placă este acoperită cu antigenul și a anticorp primar se leagă de antigen. A anticorp secundar care se leagă de primul anticorp. Al doilea anticorp conține enzima care reacționează cu substratul.

Sandwich ELISA

Aici sunt implicați doi sau trei anticorpi. Un anticorp de captare este atașat la plăci și se leagă la antigen. Aceasta este urmată de aceleași etape ca și metoda directă (numai un anticorp) sau indirectă (doi anticorpi).

Competitiv ELISA

Uneori denumită ELISA de inhibare, este un pic mai complicat. O placă este acoperită cu antigenul care trebuie cercetat. A anticorp primar cu enzima este mai întâi incubată cu o probă cu o concentrație necunoscută a aceluiași antigen. Acesta este apoi adăugat pe placă, permițând anticorpilor care sunt încă liberi să reacționeze cu antigenul de pe placă. După ce se spală complexele de anticorpi-antigen din probă, se adaugă substratul.

Atunci când proba necunoscută are o mulțime de antigen, va fi mai puțin anticorpul liber să se lege de placă = semnal inferior.