De ce sunt în faza de liză folosită în timpul purificării proteinelor?

De ce sunt în faza de liză folosită în timpul purificării proteinelor?
Anonim

Răspuns:

Pentru a purifica fracția de proteine …

Explicaţie:

Dacă purificați o proteină (adesea specifică), va trebui să scapiți de cât de mult gunoi poți fi legat de ei.

Depinde de măsura în care proteinele sunt după, dar, în general, este o idee bună, în special în pregătitor purificare, pentru a scăpa de cât mai multe impurități posibil.

1:

Deoarece proteinele sunt în general mari și, în consecință, vor apărea în benzile inferioare ale fracțiunii dvs. (ultracentrifugate), doriți să scăpați de orice acizi nucleici, în special dacă proteina pe care o puriciți se referă la cum ar fi Pol1, Reverse Transcriptase sau orice altă enzimă implicată în replicare / transcriere / traducere.

Puteți separa acizii nucleici prezenți în proba prin utilizarea unei ADNase: aceasta va hidroliza total ADN-ul în părțile componente ale acestuia.

Te gândești, există diferite ADN-uri, toate acestea diferențiind mecanismul și specificitatea pentru substratul lor. În funcție de ADN-ul folosit, se poate arăta și el endo- sau exo- activitatea nucleaza …

Mai exact, RNAse este mai adecvat, deoarece ARN este de obicei mai mult în domeniul de flotabilitate / fracțiune de proteine și poate fi legat de proteină.

2:

Lizozimul: O enzimă care are cel puțin două funcții:

Ea deglicozilează enzimele: majoritatea proteinelor transportate în sânge sunt glicozilate: au câteva molecule de zahăr atașate de ele. Lizozimul va elimina resturile de zahăr.

De asemenea, are capacitatea de a descompune peretele celular al bacteriilor Gram-Positive, cauzându-le Lyse. (dacă doriți să purificați proteinele din bacteriile Gram-pozitive)

Orice produs degradat, fie acid nucleic, fie resturi de zahăr, va apărea în fracțiunile de vârf ale tubului de centrifugare datorită flotabilității lor "mai ușoare" ….